Verifikasi kemanjuran sterilisasi autoclave

Salah satu instrumen paling penting di laboratorium mikrobiologi adalah sterilisasi, dengan autoclave (sterilisasi uap bertekanan tinggi) menjadi yang paling umum digunakan. Menurut GB 4789.1-2016, peralatan laboratorium harus secara teratur diperiksa dan/atau dikalibrasi (dengan tag inspeksi), dipelihara, dan dilayani untuk memastikan kinerja yang tepat dan keselamatan operasional. Tetapi apakah autoclave Anda mengalami inspeksi seperti itu? Dan jika Anda ingin melakukan verifikasi, bagaimana Anda harus melakukannya? Hari ini, kami akan meringkas metode utama untuk memverifikasi kemanjuran sterilisasi autoclave.

Verifikasi kemanjuran sterilisasi autoclave umumnya mencakup metode seperti indikator kimia, termometer maksimum, tabung suhu buatan sendiri, dan indikator biologis. Meskipun metode ini memiliki prinsip -prinsip yang sama - secara keseluruhan mengkonfirmasi apakah sterilizer mencapai suhu yang diperlukan selama sterilisasi - Anda dapat memilih satu atau lebih berdasarkan kondisi spesifik lab Anda.

1. Metode Indikator Kimia

Prinsip: Indikator kimia mengalami perubahan warna atau bentuk di bawah kondisi suhu dan waktu tertentu. Perubahan ini digunakan untuk menentukan apakah parameter sterilisasi telah dipenuhi.

Item yang umum digunakan di laboratorium adalah pita indikator autoclave 3M, yang berubah warna setelah sterilisasi. Pita ini terbuat dari bahan kimia termosensitif, pengembang warna, dan bahan cat, dicetak dalam pola garis pada pita perekat. Ini diterapkan langsung ke bagian luar paket sterilisasi, dengan panjang minimum 5 cm. Tekan pita dengan ringan untuk memastikan adhesi dan penyegelan yang baik. Setelah terpapar 121 ° C selama 20 menit atau 130 ° C selama 4 menit, garis -garis putih diagonal pada pita harus menjadi benar -benar hitam. Jika perubahan warna tidak rata atau tidak lengkap, paket tersebut dianggap tidak disterilkan dengan benar.

2. Metode termometer maksimum

Prinsip: Metode ini menggunakan termometer merkuri yang tidak kembali ke suhu yang lebih rendah setelah dipanaskan, mirip dengan termometer medis tradisional. Ini menunjukkan suhu maksimum yang dicapai selama sterilisasi.

Untuk verifikasi, tempatkan termometer merkuri di dalam labu Erlenmeyer yang dipenuhi air. Selama sterilisasi, posisikan labu di bagian atas dan bawah autoklaf. Setelah proses, periksa apakah pembacaan termometer cocok dengan suhu yang diperlukan. Metode ini hanya dapat memverifikasi suhu dan tidak dapat mengkonfirmasi apakah persyaratan waktu sterilisasi dipenuhi, sehingga mewakili standar minimum untuk verifikasi autoklaf.

3. Metode tabung suhu buatan sendiri

Prinsip: Metode ini menggunakan bahan kimia tertentu yang meleleh dan merekristalisasi pada suhu tertentu, dengan bentuk kristal yang khas pasca pendingin. Bahan kimia ini disegel dalam tabung kaca kecil dan ditempatkan di dalam autoklaf. Setelah sterilisasi, bentuk kristal diperiksa untuk menentukan apakah suhu yang benar tercapai.

Asam benzoat umumnya digunakan, dengan titik leleh 121–123 ° C, yang selaras dengan suhu sterilisasi standar autoklaf. Asam benzoat padat disegel dalam tabung kaca kecil dan ditempatkan di autoklaf. Setelah sterilisasi, keadaan asam benzoat diamati untuk mengkonfirmasi jika suhu target tercapai. Seperti metode termometer maksimum, pendekatan ini hanya memverifikasi suhu, bukan durasi sterilisasi.

4. Metode Indikator Biologis

Prinsip: Metode ini menggunakan spora non-patogenik Geobacillus stearothermophilus sebagai organisme indikator untuk menilai efektivitas sterilisasi termal. Spora-spora ini sangat tahan panas, dengan resistensi yang mirip dengan spora Clostridium botulinum patogenik, menjadikannya indikator yang cocok untuk memverifikasi kemanjuran sterilisasi.

Indikator biologis tersedia dalam tiga bentuk: suspensi spora, strip spora, dan tabung spora-dan-sedang terintegrasi. Ini biasanya ditempatkan di lima lokasi dalam wadah sterilisasi: bagian depan, tengah, dan belakang lapisan bawah, serta titik tengah lapisan atas dan tengah. Setelah sterilisasi, indikator diinokulasi ke dalam bromocresol air ungu-glukosa-pepton dan diinkubasi pada 55-60 ° C selama 2-7 hari. Jika medium tetap jernih dan tidak berubah dalam warna, spora terbunuh, menunjukkan sterilisasi yang baik. Jika media menjadi kuning dan keruh, spora bertahan, menunjukkan kinerja sterilisasi yang buruk. Baik suspensi spora dan strip spora mengikuti proses validasi yang sama.

Tabung indikator biologis komersial juga biasa digunakan di laboratorium. Mereka mengandung spora Geobacillus stearothermophilus dan ampul kaca tertutup dengan media pertumbuhan. Tabung ditempatkan di seluruh wadah sterilisasi. Setelah autoclaving, ampul kaca dihancurkan untuk melepaskan medium, dan tabung diinkubasi pada suhu 56 ° C, di samping kontrol positif. Jika sterilisasi tidak memadai, spora yang masih hidup akan tumbuh dan mengubah kaldu kuning. Jika sterilisasi efektif, spora tidak aktif, dan kaldu tetap ungu.

Frekuensi verifikasi

Saat ini, tidak ada standar nasional yang ketat mengenai frekuensi verifikasi kemanjuran autoclave. Laboratorium diharapkan untuk menetapkan jadwal verifikasi mereka sendiri dan mematuhi mereka. Mempertimbangkan kemudahan penggunaan dan keandalan hasil, kami merekomendasikan penggunaan pita indikator dalam kombinasi dengan tabung indikator biologis, karena mereka menawarkan operasi sederhana dan verifikasi komprehensif efektivitas sterilisasi.

Catatan sterilisasi (tidak diperlukan untuk beberapa autoklaf otomatis yang diimpor sepenuhnya)
Saat menggunakan sterilisasi uap bertekanan tinggi, penting untuk mengeluarkan semua udara dingin di dalam ruang ketika uap dilepaskan. Hanya setelah semua udara dingin dilepas jika katup buang ditutup. Jika ada udara yang tersisa, pengukur tekanan dapat menunjukkan tekanan yang benar, tetapi suhu aktual di dalam ruang akan gagal. Semakin banyak udara yang ditahan, semakin besar perbedaan antara tekanan dan suhu, yang berpotensi menghasilkan sterilisasi yang tidak lengkap. (Ini sering diamati selama sterilisasi media fermentasi, di mana gelembung udara tetap dalam tabung pemandu kecil - mencoba melelahkan udara dingin dengan lebih teliti.)